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人抗DNA酶B抗体(anti-DNaseB)ELISA试剂盒实验使用说明主要包括实验原理、样本处理、试剂准备及实验步骤等。
实验原理:
人抗DNA酶B抗体(anti-DNaseB)ELISA试剂盒采用ELISA(酶联免疫)方法,用于测定人血清、血浆及相关液体样本中人抗DNA酶B抗体的含量。实验过程中,通过间接法酶联免疫吸附试验,将样本加入预先包被人抗DNA酶B抗体捕获抗原的包被微孔中,依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体,经过温育并洗涤后,用底物TMB显色。TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗DNA酶B抗体呈正相关,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),计算样品浓度12。
样本处理:
血清样本需将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜,然后1000×g离心20分钟,取上清即可。血浆样本则需用EDTA或肝素作为抗凝剂采集。样本宜在新鲜时检测,保存过久可发生聚合,在ELISA中可使本底加深。冻结标本溶解后,应充分混匀,避免气泡。
试剂准备:
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡后方可使用。标准品需用样本稀释液复溶,并静置10分钟以上,然后反复颠倒/搓动助其溶解。洗涤缓冲液需按一定比例稀释。检测稀释液A和B以及检测溶液A也需按说明书要求准备。
实验步骤:
将试剂盒及样本置于室温平衡。
按照说明书要求设置标准品孔、样本孔和空白对照孔。
向各孔中加入相应量的标准品、样本或稀释液。
加入检测试剂,经过温育和洗涤。
加入底物显色,并在规定时间内用酶标仪测定吸光度。
根据标准品孔的吸光度值绘制标准曲线,计算样本浓度。
请注意,人抗DNA酶B抗体(anti-DNaseB)ELISA试剂盒主要用于科研方面,不用于临床诊断,实验过程中应严格遵守说明书要求,确保实验结果的准确性。
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