概述
*（Aflatoxin, AF）是由多种霉菌代谢的毒性产物，例如Asperillus flavus 和Asperillus parasiticus霉菌。他们具有致癌性，存在于谷物、坚果、棉籽和其它食品或动物饲料中。谷物可能被*的衍生物：B1、B2、G1和G2其中一种或几种污染。AFB1是目前检测到的zui毒的*，其他类型的*如果污染的浓度很高也存在很大的危险。*能够引发人类很多病症包括肝癌、黄曲霉中毒、莱耶综合症和慢性肝炎。动物容易摄取到*的原因是动物吃的饲料在生长、收割和贮存过程中可能被能够产生*的真菌污染。世界上大多数国家的政府已经对人类和动物性食品中制定了严格的**。
适用
HELICA*分析测定试剂盒原理是竞争酶联免疫法，适用于检测谷物、坚果、棉花种子、加工过的谷类食物、和一些其它的动物食品中的*B1、B2、G1 和G2。
原理
HELICA*总量测定法是一种固相竞争酶联免疫分析测定方法。聚苯乙烯微孔板中包被抗*的高亲和力抗体，这种抗体和*的四种亚型都能发生交叉反应）。利用70%甲醇提取样品中的*，把提取的样品和HRP（辣根过氧化物酶）标记的*B1混匀并加入对应的孔检测。酶标记毒素与标准品或者样品中*竞争与包被在微孔底部的抗体结合。孵育一段时间后，倒出孔里的液体，清洗后加入显色底物，在酶的作用下孔里将会出现蓝色。显色颜色的深浅与结合物的量成正比例的关系，与标准品或样品中AFM的量成反比例关系。所以，标准品或样品中的AFM浓度越高，显色的蓝色将会越浅。加入酸，终止反应，底物颜色由蓝色变为棕黄色。微孔板放进酶标仪里，在OD450nm读取吸光度值。样品的吸光度值与试剂盒中标准OD值相比较，相对应得出结果。
试剂盒组成
| 1×小袋 | 抗体包被的微孔板 | 96孔板（12×8微孔板用鼠源AF单克隆抗体） |
| 1× | 预混板（绿色） | 96孔板（12×8）没有包被抗体 |
| 6×小瓶 | AFM标准品 | 1.5mL/瓶，AFM的浓度分别为0.0、0.2、0.5、 1．0、2.0、4.0ng/mL 溶解在有机溶液中。 |
| 2×小瓶 | HRP-AF偶联物 | 2 x 12mL HRP-AFB1 添加防腐剂 的缓冲溶液，可以直接使用 |
| 1×小瓶 | 底物试剂 | 15mL TMB，可以直接使用 |
| 1×小瓶 | 终止液 | 15mL 酸性液体，可以直接使用 |
样品提取步骤
1.制备提取液：70%甲醇，用蒸馏水或无离子水稀释（每个样品需要100ml样品提取液）。
2.研磨样品（使50%的样品可以通过一个20目的滤网）。
3.称量20g研磨过滤后的样品加入100ml样品提取液，样品稀释比为1:5（w/v）。
4.在混合器上至少震荡2分钟。
5.用滤纸过滤5-10ml 以上处理的液体，收集滤液待测。
样品测定步骤
1、使用前将试剂拿到室温。
2、取出混合板放于微孔支架上用于标准和样品的测试，取相同数量的微孔（包被有抗体）置于另一个微孔支架上。
3、在每个混合板微孔中加入 200μl 酶标结合物。
4、在对应的孔中加入100 μl 标准或样品，用枪头混合3次，
注意：操作者要把每个孔标记清楚
5、转移100ul预混板微孔中的液体到对应的包被有抗体的微孔中，室温孵育15分，使用多道移液器。
6、将孔里的液体倒入合适的容器中，用蒸馏水或无离子水洗板，然后迅速弃掉洗液到合适的容器中，重复洗5次。在一层厚的吸水纸上拍板，去掉残留的洗液。
7、在吸水纸上拍打，尽可能地将水拍干。
8、每孔加入100 μl底物溶剂，室温孵育5min。
9、每孔加入 100 μl 终止液。
10、对比标准和样品的颜色，或在OD450 nm读数。
结果分析
使用原有的OD值或实验获得的OD值与标准曲线中*浓度为0时OD值的百分比值与标准中*含量建立剂量效应曲线。通过在标准品曲线中添加新数值计算被测物质中*的浓度。因为样品在处理的过程中稀释了5倍，所以实际值是测定值的5倍。样品在标准曲线上的稀释范围是1-20ppb，如果样品的浓度大于zui高标准，需要用70%的样品提取液来稀释后再测定，计算结果时要考虑到稀释的倍数。
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