恒温扩增PCR Master Mix

  Allsheng恒温扩增PCR Master Mix是一种即用型的恒温扩增试剂盒，本试剂盒包含建立恒温反应体系（除引物和模板之外）的所有组分。与目前广泛应用的real-time qPCR技术相比，其需要四到六条模板特异性的引物以及具有链置换活性的Bst酶，在恒温条件下1h内完成扩增；无需昂贵的荧光定量PCR仪；恒温检测方法具有特异性好，灵敏度高及检测范围广泛等优势，可与real-time qPCR检测技术相媲美。

交叉引物扩增技术（CPA）介绍

恒温扩增技术是继PCR技术后发展起来的一门新型的核酸扩增技术（Nucleic Acid Isothermal Amplification， NAIA），其扩增反应的全过程均在同一温度下进行。

与传统PCR技术相比，使得他们对扩增所需仪器的要求大大简化，反应时间大大缩短，因而具有巨大的应用价值，成为分子诊断行业发展的热点。

CPA扩增主要包含以下几个步骤：

1. 交叉正向引物CPF中的PFs与模板DNA中PFa互补，启动DNA合成，使得PRa被引入到所扩增的产物中；

2. 外围引物DP1s与PFa前端DP1a序列互补，通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，一边置换CPF合成的能与CPR和DP2a结合的单链产物（结构3），一边与模板DNA形成双链产物（结构2）；

3. 在结构3中，DP2a通过链置换型DNA聚合酶向前延伸，置换出由CPR所延伸的单链产物（结构5），同时合成与步骤2中由CPF延伸所产生单链DNA形成双链产物（结构4）,而结构5相对起始的DNA模板，多了PRs和PFs两个片段序列；

4. 单链结构5中的3’端的PFa和PRs可分别与CPF中的PFs和CPR中的PRa互补结合， 可在链置换型DNA聚合酶的作用下延伸和置换出相应的单链产物。延伸产物相对结构5来说又增加了一个PFs区域（结构8）；

5. 因此，扩增引物CPF和CPR的不断杂交和延伸，不仅使得结构5的长度不断的加长,从而引入更多CPF和CPR 3’端互补区域，同时也置换出了各种可与CPF和CPR 3’端互补的单链产物；

6. 通过CPF和CPR的不断杂交延伸和DNA聚合酶的链置换作用，使得DNA拷贝数不断的增加，从而达到基因扩增的效果。

应用

这种新型的核酸恒温扩增方法，其广泛应用于细菌，病原微生物，寄生虫以及病毒等的快速检测。

特点

恒温检测方法由于其特异性好，灵敏度高，反应设备及检测设备价格低廉等广受科研工作者的亲睐，是未来检测技术发展的趋势。

性能对比

使用Allsheng® 恒温 PCR Master Mix(红色)、S公司（绿色）以及D公司（蓝色）提供的恒温PCR Master Mix对对虾白斑病毒（WSSV）进行实时定量PCR测定（左），模板使用0.1ng/μl对虾白斑病毒基因组DNA。相同条件下，Allsheng®具有更好的扩增能力且重复性良好。

使用说明

请详见说明书