miRNA qPCR Kit miRNA荧光定量PCR试剂盒 产品信息
| 产品名称 | 产品编号 | 规格 |
| HRbio™ miRNA qPCR Kit miRNA荧光定量PCR试剂盒 | HRF0711 | 50T |
产品描述
HRbio™ miRNA qPCR Kit采用 SYBR Green I嵌合荧光法的原理进行miRNA的荧光定量检测。本产品包含miRNA qPCR所需要的所有试剂，组分分别是：2×miRNA qPCR Mix和Reverse primer。其中2×miRNA qPCR Mix（含SYBR Green）是专门为miRNA荧光定量检测而特别研发的新一代预混液形式的qPCR试剂。其中DNA polymerase采用的是抗体修饰的热启动形式，配合特殊的buffer体系，使得反应特异性更好，灵敏度更高，并且在更广的范围内进行准确定量。
产品组分
| 编号 | 组分 | HRF0711（125次×20 μl） |
| HRF071-A | 2×miRNA qPCR Mix(with SYBR Green I) | 1.25 mL |
| HRF071-B | Reverse primer（10μM） | 55 μL |
运输与保存方法
1.-20°C 避光保存至少 12 个月，使用前充分融解混匀。
2.2 ×miRNA qPCR Mix(With Sybr Green)短期使用可放在 4°C，避免反复冻融。
3.Reverse primer(10μM )每次用完置-20°C 保存。
注意事项
1.miRNA 链cDNA 的加入量不要超过real time PCR 体积1/10。
2.对于特殊的检测体系中，高含量的cDNA 模板易导致非特异性扩增，根据所检测miRNA 的丰度适当的稀释cDNA（5-10倍或者100倍）。
3.本品中含有荧光染料Sybr Green I，保存本品或配制PCR反应液时应避免强光照射。
4.2 x miRNA qPCR Mix不含参比染料ROX，客户并根据qPCR仪器技术指导决定是否需要加ROX参比染料，用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差
5.为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
6.本产品仅作科研用途！
操作步骤
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在室温融化2 ×miRNA qPCR Mix和Reverse primer（10μM）。
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使用时请将2 ×miRNA qPCR Mix上下颠倒轻轻均匀混合，避免起泡，并经轻微离心后使用。如果试剂没有混匀，其反应性能会有所下降。注：请不要使用振荡器混匀。
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按照下表组分冰上进行反应液的配制：
| 组分 | 体积（μL） | 体积（μL） | 终浓度 |
| 2×miRNA qPCR Mix | 25 | 10 | 1× |
| Forward Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
| Reverse Primer (10 μM) | 1 | 0.4 | 0.2 μM |
| miRNA链cDNA模板 | X | X | - |
| 无菌超纯水 | To 50 | To 20 | - |
荧光定量PCR试剂盒
【注】： 使用前务必充分混匀， 避免剧烈震荡产生过多气泡。
a) 引物浓度：通常引物终浓度为0.2 μM，也可以根据情况在0.1- 1.0 μM之间进行调整。
b) 模板浓度：如模板类型为未稀释cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
c) 模板稀释：cDNA原液建议5- 10倍稀释，模板加入量以扩增得到的CT值在20-30个循环为好。
d) 反应体系：推荐使用20μL或50 μL ，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
e) 体系配制：请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶残留的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头。避免交叉污染和气溶胶污染。
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